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青島海博生物技術有限公司作者
1 基本原理
細菌總數是指水樣在一定條件下培養后所得1ml水樣所含菌落的總數。
總大腸菌群系指一群在37℃培養24h能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。該菌群主要來源于人畜糞便，具有指示菌的一般特征，故以此作為糞便污染指標評價飲水的衛生質量。水中總大腸菌群數系以100ml水樣中污染的總大腸菌群zui可能數（MPN）表示。
按國家飲用水衛生標準規定，1毫升自來水中雜菌數不得超過100個，大腸菌群數1000毫升水中不得超過3個才算合格。
2 材料
營養瓊脂、乳糖膽鹽發酵培養基、酒精、棉簽、培養皿、無菌廣口瓶
3 方法
3.1 采樣（自來水）：先將水打開，放水1~2分鐘后，關閉水。用酒精棉球灼燒三分鐘滅菌，再開放水使水流5分鐘，用無菌瓶收集水樣。
3.2 細菌總數檢查：
3.2.1 用滅菌吸管吸取1ml水樣，注入滅菌培養皿中，共做2個。
3.2.2 分別傾注約15ml已熔化冷卻至45℃左右的營養瓊脂，混勻后置37℃培養24小時進行菌落計數，同時應作一空白對照。兩個培養皿的平均菌落數即為水樣1ml中的細菌總數。
3.3 大腸菌群數檢查：
乳糖發酵試驗→分離培養→證實試驗→報告
3.3.1 乳糖發酵試驗：
自來水的接種方法：在2個裝有50ml三倍料乳糖膽鹽發酵液的三角瓶中，各加入100ml水樣；在10支裝有5ml同樣發酵的試管中，各加入10ml水樣，混勻。將上述各發酵管（瓶）置36±1℃溫箱內，培養24±2小時，觀察結果。如所有發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則按下列程序進行。
3.3.2 分離培養：將產氣的發酵管用接種環分別以劃線法轉接于伊紅美蘭瓊脂平板上，置36±1℃溫箱內，培養18~24小時，取出觀察菌落形態。
3.3.3 證實試驗：在每個平板上，挑取可疑菌落（紫黑色或淡紫紅色，有或略有或沒有金屬光澤的菌落）1~2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發酵管，置36±1℃培養24±2小時進行復發酵試驗，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的芽孢桿菌即可報告為大腸菌群陽性。
4 報告
每毫升自來水所含菌落數以個/mL表示；根據證實為大腸菌群陽性的管數，查大腸菌群檢索表，報告每升水樣的大腸菌群的zui可能數。
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