CHNO氧化酶XOD測試盒_氧化與抗氧化_分光法
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
XOD(EC 1.17.3.2)催化CHNO氧化生成尿酸和超氧陰離子,是活性氧主要來源之一;同時也是核苷酸代謝的關鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心,肺,肝臟等組織中,當肝功能受損時,XOD大量釋放到血清中,對肝損害的診斷具有特異性的意義。
測定原理:
XOD催化CHNO產生尿酸,尿酸在290nm下有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
CHNO氧化酶XOD測試盒_氧化與抗氧化_分光法
試劑組成和配制:
提取液:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:60mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×4瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
操作步驟:
1、分光光度計預熱30min以上,調節波長至290nm,蒸餾水調零。
2、XOD檢測工作液的配制:用時在每瓶試劑二中加入15mL試劑一,充分混勻,現配現用;
3、測定前將XOD檢測工作液37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min。
4、取1mLXOD檢測工作液于1mL石英比色皿中,再加入35μL樣本,混勻,室溫下立即測定290nm下的初始吸光值A1和1min后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。