聚丙烯酰胺凝膠獨選錦豪廠家,聚丙烯酰胺凝膠電泳作用:用于分離蛋白質和寡核苷酸。
作用原理 聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠及SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE);非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,并依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。 而SDS-PAGE僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。該技術zui初由shapiro于1967年建立,他們發現在樣品介質和丙烯酰胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑后,蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決于亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。 SDS是陰離子去污劑,作為變性劑和助溶試劑,它能斷裂分子內和分子間的氫鍵,使分子去折疊,破壞蛋白分子的二、三級結構。而強還原劑如巰基乙醇,二硫蘇糖醇能使半*殘基間的二硫鍵斷裂。在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS后,分子被解聚成多肽鏈,解聚后的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束,所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的電荷量,這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。 SDS-PAGE一般采用的是不連續緩沖系統,與連續緩沖系統相比,能夠有較高的分辨率。 濃縮膠的作用是有堆積作用,凝膠濃度較小,孔徑較大,把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區帶。當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCL緩沖液,電極液選TRIS/*。電泳開始后,HCL解離成氯離子,*解離出少量的*根離子。蛋白質帶負電荷,因此一起向正極移動,其中氯離子zui快,*根離子zui慢,蛋白居中。電泳開始時氯離子泳動率zui大,超過蛋白,因此在后面形成低電導區,而電場強度與低電導區成反比,因而產生較高的電場強度,使蛋白和*根離子迅速移動,形成以穩定的界面,使蛋白聚集在移動界面附近,濃縮成一中間層。 此鑒定方法中,蛋白質的遷移率主要取決于它的相對分子質量,而與所帶電荷和分子形狀無關。
聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis) 聚丙烯酰氨凝膠電泳
,是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成,聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨(AP)為催化劑,以四甲基乙二胺(TEMED)為加速劑。在聚合過程中,TEMED催化過硫酸銨產生自由基,后者引發丙烯酰胺單體聚合,同時甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產生甲叉鍵交聯,從而形成三維網狀結構。
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關鍵詞:催化劑