在許多模式生物研究中,研究人員需要對各種小型模式生物,如秀麗線蟲、斑馬魚幼魚、果蠅、擬南芥等進行觀察和分選。對于傳統流式細胞儀來說,小型模式生物粒徑過大且很脆弱,很容易在實驗過程中破碎或死亡,而鏡下手動分選繁瑣且枯燥,分選充滿主觀因素,因而限制了實驗的規模和準確率。為了這一空白,在1998年,COPAS 系統(大粒徑復雜顆粒物參數分析和分選儀)應運而生。
型號:COPAS Infinity
COPAS系統是 Union Biometrica 公司基于傳統流式細胞儀原理設計發明的一款用于大粒徑顆粒物全自動高通量分析分選平臺,先應用于秀麗線蟲高通量藥物篩選,COPAS 系統又被人稱作“線蟲篩選器”。其通過自動化代替了耗時的手工分選過程,大大減少了實驗所需的時間,消除人為誤差,實現了以無法想象的高通量藥物篩選。
COPAS Infinity 與初的 COPAS 流式細胞平臺一樣,提供了對活的多細胞生物、細胞簇、單細胞、種子和無機顆粒等對于傳統流式細胞儀來說太大或太脆弱樣品的自動化高通量分析和分選。此外,COPAS Infinity 在更小的尺寸范圍內大大提高了檢測靈敏度,并增加了參數檢測數量,搭配 Profiler 高軟件可對樣品進行細致分析。
研究多細胞結構的實驗人員都知道,細胞形成群體結構之后,其信息交互和行為會與單細胞時明顯不同。COPAS Infinity 大粒徑模式生物流式分選平臺系統儀允許實驗人員對組織、腫瘤或器官中的細胞與細胞之間的相互作用進行研究,而不需要用傳統的方法破壞其整體結構。而針對模型生物,COPAS Infinity 可以代替手工分揀,提供快速、靈敏、溫和、重復性高的全自動化、高通量分析和分選功能。
利性技術原理
基于傳統流式細胞儀原理,樣品在壓力的作用下從連續攪拌的樣品杯進入流動室(FlowCell),在鞘液的包裹下形成一條狹窄的液流進入流動室中心,通過激光束的檢測。系統根據激光束檢測結果控制樣品的去留,默認狀態下,樣品被溫和的氣流引導至“回收容器”中,當系統接收到分選信號時,空氣分選器短暫關閉,含待分選樣品的液滴,即可直接流入對應容器中完成分選。
與傳統流式細胞儀相比,大粒徑流式分選平臺在幾個重要的設計上有所不同:
(1)大粒徑流動室可以容納 2-1500μm 樣本,比傳統流式細胞儀要大得多,使其能夠完成大粒徑生物樣本的高通量分選,包括但不限于秀麗線蟲、果蠅、蠶卵、斑馬魚、擬南芥、干細胞、胰島、花粉等;
(2)較慢的液流流速和較低的運行壓力,樣品分選過程中液流剪切力小,避免了高剪切力對生物樣本的損害,保證模式生物和多細胞樣本的生物活性;
(3)利氣壓分選技術,利用溫和氣流將生物樣本以液滴的形式進行分選,相比較傳統流式技術采用機械力或靜電電荷力進行分選,避免了生物樣品的破碎即失活。
控制和分析軟件
FlowPilot 軟件為大粒徑流式分選平臺設計,平臺集成功能強大的硬件和用戶友好的軟件控制,能夠直觀地呈現各樣品參數,并通過多種不同的分選模式對各樣品逐一分選,獲得目標樣品及量化的樣品參數數據,方便、快捷且結果有據可循,特別適合于各種高通量微模式生物研究及大規模藥物篩選等域。
可使用 FlowPilot 控制軟件進行如下操作:
(1)根據個人喜好輕松地進行儀器控制、數據采集和分配選項面板的訪問或隱藏;
(2)自定義和操作多個獨立的統計圖像(各參數直方圖、X-Y關系圖等),包括每個區域的自定義縮放和邏輯門控選項;
(3)檢索實驗文件、樣本模板和數據分析文件(在線或離線),為采集后再分析提供了強大的工具支持;
(4)創建自定義的分選輸出模板,用于對于多孔板中每個孔的分配信息進行設定;
(5)以標準的流式細胞儀格式存儲數據,以便以后使用實驗室中其他傳統的流式細胞儀軟件進行分析等。
Profiler/FlowPilot ProTM 軟件
Profiler/FlowPilot Pro 高功能是在 FlowPilot 軟件基礎上,進一步對樣品個體光密度(EXT)和熒光參數(Red、Green、Yellow)的徑向分布進行掃描,獲得 Profiler 圖像,根據 Profiler 圖形可對生物樣品進行進一步處理和分析。
Profiler 可以沿樣本軸向長度(TOF)進行多達8000個光學數據采樣,將數據采集從整體水平提升到器官和多細胞的水平。隨后,軟件以圖形和數字的形式呈現這些信號沿物體長度方向上的變化,向實驗人員顯示每個樣品在多個“光學剖面”上所有光學參數的地形圖及強度變化,以峰高、峰寬、峰數和相對位置的形式進行表現——所有參數都可作為后續的分選條件。
Partial Profiling
Profiler 的另一個分析特性是“Partial Profiling”部分剖析,在樣本上選定一個區域,“Partial Profiling”會顯示出該區域詳細光學或熒光特性(峰高、峰寬及數量等),以生成用戶自定義分選參數,“Partial Profiling”可以用于分析樣品部分區域的光學特性。
COPAS Infiniy 標配利性 FlowPilot-Pro 軟件平臺,集成功能強大的硬件和直觀的用戶控制,提高了光學靈敏度、流體力學參數調節和定量分選性能,為科研人員的實驗室提供了更高別的分析分選功能和用戶體驗,特別是在高通量篩選上系統性能更加、靈活性和易用性更加強大。
特點及優勢
適用范圍廣
直徑 2-1500μm 樣品,從無機細顆粒物到斑馬魚均適用;
多種 COPAS Infinity 產品型號可供選擇,每種規格產品適用于某一特定粒徑范圍樣品使用;
多PMT和激光器可選,可用于各種熒光標記物研究;
分選模式多樣化,清晰辨別樣本差異;
數據客觀
量化生物顆粒徑向長度(TOF)、光密度(EXT)和熒光參數,快速分析顆粒性質;
自定義參量范圍,系統根據設定值自動篩選;
具有熒光補償功能,測量參數更準確;
系統自動檢測、計算、比對生物微粒各項參數,完成篩選過程,排除人為因素干擾;
標配 Profiler 軟件可對單微粒光密度、熒光參數的徑向分布做進一步細致分析。
全自動,準確高效
大分選速率可達20萬個/小時,節約大量人工成本;
系統按照程序,自動將生物微粒分配到96孔板或其他孔板中;
系統對每一個生物微粒逐個分析、分選,重現性更好;
適合大規模篩選,是目上應用成功的微模式生物分選系統。
生物活性保持
分選過程始終保持無菌環境,防止樣本污染;
氣流分選及低運行壓力保證生物樣本的生物活性和完整性;
高認可度
截止2019年,大粒徑流式分選平臺在已有超過2000個用戶,發表文獻數千篇,產品分布于多個國家大學和研究所實驗室,應用涵蓋各個方面,認可度高。
硬件設計
固定流動室設計,用性強。COPAS Infinity 為用性設計,每臺機器只能用于某個固定粒徑范圍樣品分析分選使用;
根據系統所配置的流動室光學核心模塊(Fluidics and Optics Core Assemblies,FOCA)的不同,COPAS Infinity 系統有四種不同的型號。下表為不同規格 COPAS Infinity 系統所適用的樣品粒徑范圍以及常用的研究對象。
模塊化光學系統
COPAS Infinity 光學系統包括激光器、FOCA、軸向光檢測器、FS軸向散射光檢測器、PMT熒光散射傳感器以及濾光片等組成。COPAS Infinity 系統多可以配置3個激光器,軸向光檢測器用于樣品軸向長度(TOF,飛行時間)的測量,樣本阻擋光線的總積分信號決定了樣品光密度(EXT,透光度)的大小。FS檢測器測量樣本軸向小角度散射光量,熒光散射可在四種不同的PMT探測器上同時測量,PMT探測器和濾光片元件也可根據用戶需求進行相應配置。
X-Y活動性分選平臺
X-Y分選平臺允許用戶將分析結束的樣品進行分選純化并允許分配到24/48/96/384孔板、離心管或其他容器中,COPAS Infinity 系統允許用戶創建自定義輸出模板,用戶可在軟件上編輯分選程序,包括每個分配位置包含的信息,如每個孔位輸出的樣本類型及個數等。
集成化功能(Integration)
COPAS Infinity也可作為多步工作站(Workflow)一個組成部分,允許響應來自外部控制器和軟件的指令信號觸發其進行工作。
COPAS Infinity的設計占地面積小,能夠更容易地安裝在商用生物安全柜內,從而提高安全性和無菌性。
多樣化進樣方式
樣品通常從50mL樣品管種自動加樣,攪拌器輔助防止樣品聚集,從而保證上樣均勻,較大粒徑的樣品可選配750mL和1500mL大型進樣杯和攪拌器。另外,針對異常脆弱或易于下沉/上浮的樣品(如脂肪細胞、植物原生質體等),可選擇5mL小型旋轉樣品杯OSIS (Oscillating Sample Introduction System) 來進行加樣。LP SamplerTM
LP Sampler(Large Particle Sampler)是門為溫和處理直徑10-1500μm的大顆粒、易碎樣品而設計的自動加樣系統,它能夠從多孔板或培養皿中輕輕抽吸這些樣品,并將其完整、可行地輸送至COPAS Infinity系統。
配置選擇方案
(1) FOCA類型選擇
根據實驗需求選擇合適規格型號FOCA
(2) 多激光配置
多三色激光器可選用于激發樣品熒光,標配488nm藍色激光器,可選375-660nm激光器
(3) 進樣方式選擇
根據COPAS Infinity規格不同可選擇50,750或1500mL規格樣品杯進樣,針對特殊樣品(如脂肪細胞等),可選擇5mL旋轉樣品杯進行加樣。也可選配Large Particle (LP) Sampler™ 系統可以將10-1500 μm范圍內的樣品從多孔板、培養皿或者其他容器中進行全自動上樣
(4) 集成化功能(Integration)
完整的高通量分選平臺
COPAS Infinity 大粒徑顆粒物高通量分選平臺能可配合LP Sampler組成一套更加完整的高通量分選平臺;
能夠實現從多孔板進樣到多孔板分選的全自動化操作;
型號:COPAS Infinity & LP Sampler
應用域
大粒徑流式分選平臺可用于直徑在2-1500μm的生物或非生物樣本分析分選,以下是來自2000位用戶發表文章統計的常見應用,相關文獻您可以移步到網站來參閱:/publications