MitoLite 線粒體綠色熒光探針 是一種陽離子染料，可以通過線粒體膜電位梯度選擇性地積聚在線粒體中。線粒體指示劑是一種疏水性化合物，很容易透過完整的活細胞，并在進入細胞后被線粒體捕獲。這種熒光線粒體指示劑長時間保留在線粒體中，因為該指示劑帶有細胞保留基團。這一關鍵特性顯著提高了染色效率。它可以很容易地適用于各種熒光平臺，如微孔板分析，免疫細胞化學和流式細胞術。它適用于增殖和非增殖細胞，可用于懸浮細胞和貼壁細胞。MitoLite 線粒體綠色熒光探針 是AAT Bioquest研發的產品。
MitoLite 染料的分析方案
概述
準備細胞
添加染料工作溶液
在37°C孵育30分鐘至2小時
清洗細胞
在熒光顯微鏡下分析
操作步驟
1.準備線粒體染色溶液：
1.1解凍MitoLite 染料至室溫。
1.2通過將20μL500X Mitolite 染料稀釋到10 mL Hanks和20 mm Hepes緩沖液或緩沖液（HBSS）中，制備染料工作溶液。
注1：20μLMitolite 染料足以用于一個96孔板。 在<-15℃下分裝并儲存未使用的MitoLite 染料儲備溶液。 保護它免受光照，避免反復凍融循環。
注2：熒光線粒體指示劑的濃度根據具體應用而變化。 可以根據特定細胞類型和細胞或組織對探針的滲透性來修改染色條件。
2.準備和染色細胞：
2.1對于貼壁細胞：a.在96孔黑色壁/透明底板（100μL/孔/ 96孔板）中或在裝有適當培養基的培養皿內的蓋玻片上培養細胞。當細胞達到所需的匯合時，加入等體積的染料工作溶液（來自步驟1.2）。 b.將細胞在37oC，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。 c.用預熱（37oC）Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HBSS）或您選擇的緩沖液（例如濃度為1：1的生長培養基緩沖液）替換染料加載溶液或清洗（特別是對于＃22679）細胞。用HBSS或生長培養基填充細胞孔。 d.使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。
注意：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或孵育時間以使染料積累。
2.2對于懸浮細胞：將細胞以1000rpm離心5分鐘以獲得細胞沉淀并吸出上清液。在預熱（37℃）生長培養基中輕輕重懸細胞沉淀，并加入等體積的染料加工溶液（來自步驟1.2）。將細胞在37℃，5％CO2培養箱中孵育30分鐘至2小時。用Hanks和20mM Hepes緩沖液（HH緩沖液）或緩沖液替換染料加載溶液或洗滌（特別是對于＃22679）。（例如生長培養基濃度為1：1的緩沖液）。用HBSS或生長培養基填充細胞孔。使用配有所需濾光片組的熒光顯微鏡觀察細胞。
注1：如果細胞看起來沒有充分染色，建議增加標記濃度或培養時間以使染料積累。
注2：懸浮細胞可以附著在用BD Cell-Tak®（BD Biosciences）處理過的蓋玻片上，并作為粘附細胞染色（見步驟2.1）。
