實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀(guān)察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照，與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類(lèi)及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長(zhǎng)期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）測(cè)試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6395 |
商品介紹：
測(cè)定意義: APX是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線(xiàn)粒體、過(guò)氧化物和乙醛酸體，以及過(guò)氧化體和類(lèi)囊體膜上。APX 催化H2O2氧化AsA，是植 AsA 的主要消耗者。APX的活性直接影響到AsA的含量，APX與AsA具有一定的負(fù)相關(guān)性。 測(cè)定原理： APX 催化催化H2O2氧化AsA，通過(guò)測(cè)定AsA氧化速率，來(lái)計(jì)算得APX活性。 自備儀器用品： 低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)礊榉磻?yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
2 ug pHY43 pHY43 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
鈉瓊脂基礎(chǔ) NaHCO3 Agar Base 250g
1瓶 JEG-3細(xì)胞株 JEG-3 低溫運(yùn)輸和保存
2.5L圓底立式厭氧培養(yǎng)袋 2.5L Round bottom vertical anaerobic culture bag 10個(gè)/包
200µg RecA蛋白 RecA -20℃保存
500mL Sodium Phosphate Buffer（鈉緩沖液）,0.2M,pH7.6 Sodium Phosphate Buffer,0.2M,pH7.6 常溫保存
1 管 KM 71酵母菌 KM71 Yeast Strain -80℃保存
胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 (TSB)（顆粒） 250g
50mL RNA洗脫液 RNA Elution Buffer 常溫
2 ug pCMV6-AC-GFP pCMV6-AC-GFP 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
溴甲紫葡萄糖瓊脂 Bromcresol Purple Dextrose Agar 250g
抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）測(cè)試盒微量法SPDYA 細(xì)胞周期G2/M期快速誘導(dǎo)蛋白SPDYA抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-rabbit IgG/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
Wnt6 信號(hào)通路Wnt6抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Goat IgM/AP 堿性磷酸（AP）標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml
GCN2 蛋白激GCN2蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlPRMT1 蛋白質(zhì)甲基轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.1ml
KLF8/KLF3 KLF樣轉(zhuǎn)錄因子8抗體 規(guī)格: 0.1mlHeparanase 乙酰肝素抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540) 磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlMAPK organizer 1/Morg1 絲裂原活化蛋白激組織蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
ANGEL1 ANGEL1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlDonkey Anti-Goat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的驢抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml
BRP44 腦蛋白44抗體 規(guī)格: 0.2mlFbx15 Fbx15蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-p90RSK(Ser380) 磷酸化絲/蘇激p90RSK蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400) 磷酸化絲裂原活化蛋白激激8抗體 規(guī)格: 0.1ml
IL-14/Taxilin alpha 白介素14抗體 規(guī)格: 0.1mlDACH2 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子DACH2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1mlphospho-P53(Ser46) 磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml
FAM96B FAM96B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlIGFBP1 胰島素樣生因子結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
SCYLV 甘蔗SCYLV抗體 規(guī)格: 1mlPhospho-Tuberin/TSC2(Ser664) 磷酸化結(jié)節(jié)性硬化蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
